目的 观察质粒DNA在大鼠术后肠黏连模型中的表达效率及肝细胞生长因子(HGF)基因转移对术后肠黏连的预防作用。
方法 以 pcDNA3-HGF 转染 CHO 细胞 24 h后收集培养上清,用 ELISA 测定培养上清中 HGF 的浓度;取培养的大鼠腹膜间皮细胞作划痕试验,观察表达 HGF 的培养上清对间皮细胞迁移的影响。利用无菌干纱布擦伤盲肠的方法建立 Wistar 大鼠术后肠黏连模型,将模型大鼠随机分为 5 组,每组 10 只。其中 4 组分别于创面涂布 pcDNA3-HGF 10、50、100 和 200 g,1 组于创面涂布绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒 pcDNA3-GFP 200 g 作为对照。术后第2、14 天分别解剖 pcDNA3-GFP 200 g 组大鼠各 2 只取腹膜组织,荧光显微镜下观察 GFP 的表达;术后第14天解剖各组动物,观察肠黏连的发生情况。
结果 pcDNA3-HGF 质粒转染CHO细胞后 24 h 培养上清的 HGF 浓度达 40 ng/ml,该上清能够促进大鼠腹膜间皮细胞的迁移。pcDNA3-GFP 200 g 组大鼠术后第 2 天腹膜组织中观察到 GFP 的表达,并持续到术后第 14 天。术后第14 天各组大鼠中均有发生不同程度肠黏连者,pcDNA3-HGF 10、50、100 和 200 g 组和 pcDNA3-GFP 200 g 组大鼠肠黏连发生率分别为 9/10、7/10、6/10、4/10和 9/10,其中重度(3 ~ 4度)肠黏连发生率分别为5/10、5/10、2/10、3/10、7/10,pcDNA3-HGF对术后肠黏连的预防效果呈一定的量效关系。
结论 质粒DNA能有效转染损伤腹膜并介导外源基因表达;质粒载体介导 HGF 基因转移是预防术后肠黏连的有效手段。
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