目的 以表达绿色荧光蛋白的重组腺病毒(rAdvGFP)为模式病毒,模拟实验室内利用次氯酸钠灭活含病毒废液和利用紫外线对生物安全柜台面进行消毒的实验室操作,并评价其可靠性及影响因素。 方法 终浓度为 0(阳性对照)、0.5%、0.2%、0.1%、0.05% 的次氯酸钠溶液(0.5%、0.2%、0.1%、0.05% 次氯酸钠组)分别与 rAdvGFP 溶液(1 × 106 TCID50)混合后,将混合液原液与混合液的 1:10 ~ 1:105 倍比稀释液分别接种人胚肾 293 细胞,在荧光显微镜下观察 GFP 蛋白的表达。将 rAdvGFP 溶液(1 × 103 TCID50)置于紫外灯下分别照射 0(阳性对照)、15、30、60、120 min(15、30、60、120 min 照射组),各组再按垂直照射高度的不同分为 5、10、20、30、67 cm 亚组,照射后收集各组病毒液接种 293 细胞,在荧光显微镜下观察 GFP 蛋白的表达。实验均重复 3 次。 结果 各组次氯酸钠病毒混合液原液均造成细胞不同程度的损伤,其中 0.5% 次氯酸钠组混合液原液对细胞的毒性作用较强;稀释 10 倍后,除 0.05% 次氯酸钠组外,其余各浓度次氯酸钠组稀释液均导致细胞不同程度的死亡;稀释 102 倍后,仅 0.5% 次氯酸钠组稀释液仍对细胞具有毒性作用。荧光显微镜下观察显示,仅 0.1% 次氯酸钠组的 1:10、1:102 倍稀释液和 0.05% 次氯酸钠组的 1:10、1:102、1:103 倍稀释液接种细胞可见绿色荧光。紫外线照射后在荧光显微镜下观察显示,15 min 照射组的各亚组细胞均可见明显绿色荧光;30 min 照射组的 20、30、67 cm 亚组与 60、120 min 照射组的 67 cm 亚组细胞仍可见绿色荧光。 结论 有效氯浓度须在 0.2% 以上、安全柜内 1.12 mW/cm2 强度紫外线照射 30 min 以上方能有效灭活重组腺病毒,建立实验室操作的可靠性评价技术体系并据此制定标准操作规程很有必要性。
国家食品药品监督管理局进一步加强使用丁基胶塞的头孢类注射剂监督管理