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• 2012年, 7卷, 第3期
  刊出日期：2012-06-10

    

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  “雾里看花”的中国生物治疗产业

  王小宁

  2012, 7(3): 161-163. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.001

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论著
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  论著

  利用光学成像系统非侵入性监测乳腺癌细胞在骨环境内的生长情况

  严伟, 金芳纯, 范启明, 汤亭亭

  2012, 7(3): 164-170. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.002

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  目的  应用稳定表达红色荧光蛋白的人乳腺癌MDA-MB- 231SArfp 细胞系，建立乳腺癌骨移植瘤动物模型，并应用活体成像技术检测肿瘤的生长情况。 方法  注射 MDA-MB-231SArfp 细胞于 BALB/c 雌性裸小鼠胫骨髓腔，应用活体光学成像系统，连续观察肿瘤细胞在体内的生长情况，同时测量肿瘤体积的变化；4 周和 7 周时拍摄 X 线片并做组织学检查，评估肿瘤对骨组织的影响。 结果  利用活体光学成像系统监测发现，至第 3 ~ 4 周期间，肿瘤进入对数生长期；肿瘤大小与荧光信号强度呈线性正相关。X 线片和组织切片显示 MDA-MB-231SArfp 细胞形成溶骨性的骨破坏。 结论  成功建立了可非侵入性监测的乳腺癌骨移植瘤模型，利用活体光学成像系统结合 X线片及组织学检查能够直观、连续、准确地检测肿瘤细胞在骨环境内的生长情况，为后续抗肿瘤药物的筛选和评价提供了新的手段和工具。
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  论著

  鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移

  赛岩, 代学强, 白纪民, 刘勇, 常菁, 范礼斌, 崔春萍

  2012, 7(3): 171-177. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.003

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  目的  确定鞘氨醇激酶（SPK）在肝癌转移中的作用。方法  用 Ad-SPK1 腺病毒感染肝癌细胞 LM-3 使其 SPK 过表达，Western blot 检测 SPK1 表达及激活情况；Transwell、划痕实验检测肝癌细胞迁移情况。体外管状结构形成实验检测 SPK 对脐静脉内皮细胞（HUVEC）管状化形成的影响。建立 SPK 过表达裸鼠模型，体内检测肝癌迁移情况。结果  在体外 SPK 对肝癌细胞的迁移无显著影响；Ad-SPK 能够促进 HUVEC 管状结构形成；裸鼠皮下移植瘤结果显示 Ad-SPK 促进肿瘤生长和转移。结论  鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移。
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  论著

  结核分枝杆菌铁氧还蛋白还原酶FdrA和FprA在CYP125A1的电子传递链中的作用分析

  乔峰, 张健美, 白银磊, 杨信怡, 李聪然, 李国庆, 胡辛欣, 游雪甫

  2012, 7(3): 178-186. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.004

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  目的  体外评价结核分枝杆菌（Mtb）铁氧还蛋白还原酶 FdrA 和 FprA 的活性，探索它们分别与两种铁氧还蛋白的偶联作用，并分析它们在 CYP125A1 的电子传递链中的作用。方法  采用大肠杆菌作为宿主克隆结核分枝杆菌 FdrA、FprA 和 CYP125A1 编码基因并进行蛋白外源表达；以 NADH 或 NADPH 为电子供体，2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）为电子受体评价 FdrA 及 FprA 的活性；应用细胞色素 C 为电子受体研究 FdrA 或 FprA 与不同铁氧还蛋白的偶联作用；分析 CYP125A1 对 4-胆甾烯-3-酮的代谢作用进而研究 FdrA 和FprA 在 CYP125A1 的电子传递链中的作用。结果 FdrA 对 NADH 亲和力较高，Fdx 对FdrA 活性有明显提升作用，菠菜铁氧还蛋白（spFDX）对其活性没有提升作用，FdrA/Fdx 和 FdrA/spFDX 均不能支持 CYP125A1 的活性。FprA 对 NAPDH 亲和力较高，Fdx 和 spFDX 均对 FprA 活性有明显提升作用，Fdx 尤甚，FprA/spFDX 可以支持 CYP125A1 的活性，FprA/Fdx 不能支持 CYP125A1的活性。结论  FprA 是结核分枝杆菌 CYP125A1 的电子传递链蛋白，FdrA 可能不是 CYP125A1 的电子传递链蛋白。
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  论著

  重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌的构建和分泌表达

  李辉, 陈思, 马娇颖, 戴君, 谢光蓉, 陈建华

  2012, 7(3): 187-190. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.005

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  目的  构建重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌及其目的蛋白的分泌表达，并对其酶活性进行测定。方法  从 pET-22b/pUOX 重组质粒上 PCR 获得 pUOX 基因，然后通过重叠延伸 PCR 技术将 pUOX 与一段 nprB 信号肽基因相连，导入穿梭载体 pP43X，构建重组载体 pP43X/pUOX，运用化学转化法转化枯草芽孢杆菌 WB800 中。结果 发酵表达后胞外分泌液经 SDS-PAGE 检测，在约 34 kD 处有一清晰蛋白条带，这与预期分子量一致。发酵液中该重组蛋白的酶活力达 2.322 U/ml。结论  成功构建重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌，目的蛋白分泌表达并具有较高活性。
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  论著

  以结核分枝杆菌H37Rv莽草酸脱氢酶为靶点的高通量筛选模型的建立及应用

  陈小娟, 崔佳飞, 杨延辉, 关艳, 张雪莲, 肖春玲

  2012, 7(3): 191-196. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.006

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  目的  建立以结核分枝杆菌莽草酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型；用此模型筛选莽草酸脱氢酶抑制剂；进一步评价化合物对莽草酸脱氢酶活性的影响。方法  表达并纯化结核分枝杆菌 H₃₇Rv 莽草酸脱氢酶；利用还原型辅酶II（NADPH）在溶液中的光吸收，测定酶的活性，构建了该酶抑制剂的高通量筛选模型；用 Z′ 因子法评价该模型的可靠性，并对 5 万余个化合物进行筛选；测定了各抑制剂的 IC₅₀ 并对抑制剂 6186050 的酶抑制动力学进行了研究；用菌液稀释法评价了抑制剂对某些临床分离菌株包括耐药菌株的影响。结果  得到了重组莽草酸脱氢酶；测得比活力为 20987 U/mg，所建的莽草酸脱氢酶高通量筛选模型 Z′ 因子为 0.76，符合高通量筛选的要求；对 5 万余个化合物进行筛选得到 9 个抑制率较高的化合物；抑制剂6186050 为竞争性可逆抑制剂；抑制剂 6230384 和 6186050 对海分枝杆菌的最低抑菌浓度（MIC）都是 32 μg/ml。结论  建立了稳定性好、灵敏度较高的结核分枝杆菌莽草酸脱氢酶抑制剂高通量药物筛选模型，应用该模型筛选得到的抑制剂可能具有抑菌活性。
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  论著

  基于反义RNA技术的FabI抑制剂筛选模型的构建

  殷瑜, 戈梅, 钱秀萍, 陈代杰

  2012, 7(3): 197-201. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.007

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  目的  基于反义 RNA 沉默技术构建针对细菌 FabI 的超敏全细胞筛选模型，用于筛选 FabI 抑制剂。方法  以 Escherichia coli 基因组 DNA 为模板，PCR 扩增 fabI 基因的 –74 ~ 86 bp 核苷酸序列，反向插入携带 paired termini 结构的反义质粒 pHN678 中，得到重组质粒 pHNF，再转化至 E.coli 中，得到反义工程菌 E.coli/pHNF；通过平板表型观察对反义工程菌进行筛选；考察了 IPTG 浓度对筛选模型的影响，确定 96 孔板抗菌筛选模型的条件，并用三氯生作为阳性对照、氨苄西林和浅蓝菌素作为阴性对照对该模型进行评价。结果  获得了针对 fabI 的反义工程菌，确定了最适 IPTG 浓度为 40 μmol/L，成功构建了 FabI 特异性酶抑制剂的超敏全细胞筛选模型，并验证了其可行性。应用该筛选模型对 5847 个内生真菌次级代谢产物进行活性筛选，初筛阳性率约为 9.7%，经复筛后获得 8 份阳性样品。结论  成功建立了基于反义 RNA 沉默技术的 FabI 超敏全细胞筛选模型，并利用该模型筛选到 8 份阳性样品。
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  论著

  鼠疫F1蛋白原核分泌性表达及鉴定

  魏东, 王国治

  2012, 7(3): 202-205. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.008

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  目的 构建重组质粒，在大肠杆菌中表达鼠疫菌 F1 抗原。 方法  用 PCR 方法扩增出带有信号肽的 F1 基因，将其克隆到表达载体 pET30a(+) 上，转化大肠杆菌BL21(DE3)；用 IPTG 诱导目的基因表达，层析方法纯化 F1 蛋白，测定其分子量、等电点、N 末端氨基酸序列，用 Western blot 法检测其抗原性。 结果 根据双酶切和 DNA 测序结果显示，F1 基因成功连接到表达载体 pET30a(+) 中，F1 蛋白主要为分泌性可溶表达。测定纯化后 F1 蛋白的相对分子量约为 15.6 kD，等电点为 4.15，N 末端氨基酸序列与理论序列一致。经 Western blot 鉴定，能被兔抗鼠疫菌 EV 株血清识别。 结论 成功克隆并构建了 F1 蛋白分泌性原核表达系统，所表达的重组 F1 蛋白具有较好的抗原性，为新型鼠疫疫苗研制提供基础。
综述
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  综述

  钙结合蛋白S100A11生物学功能及其相关疾病研究进展

  刘晓燕, 尹磊淼, 王宇, 徐玉东, 魏颖, 冉君, 单纯筱, 杨永清

  2012, 7(3): 206-210. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.009

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  综述

  细胞信号通路与动脉粥样硬化

  卢琼, 谭睿, 崔文婷, 蔡少青

  2012, 7(3): 211-215. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.010

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  综述

  宏基因组技术研究进展

  印蕾, 高向东, 顾觉奋

  2012, 7(3): 216-220. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.011

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  综述

  超顺磁氧化铁纳米粒子特性研究

  赵戎蓉, 鲁芳

  2012, 7(3): 221-223. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.012

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技术与方法
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  技术与方法

  D-二聚体单克隆抗体制备及其在免疫荧光快速定量检测中的应用

  康可人, 吴培钿, 卢艳华, 张健, 唐时幸, 王继华

  2012, 7(3): 224-228. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.013

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  技术与方法

  结核分枝杆菌早期培养滤液蛋白的制备和应用

  都伟欣, 杨蕾, 苏城, 沈小兵, 徐苗, 卢锦标, 王国治, 陈保文

  2012, 7(3): 229-231. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.014

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调查与研究
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  调查与研究

  诺卡菌属菌株04-5195发酵产物5195B的分离鉴定及其体外抗骨质疏松活性研究

  孙银玲, 贺晓波, 李永臻, 孙海峰

  2012, 7(3): 232-234. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.015

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讲座
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  讲座

  如何用SAS软件正确分析生物医学科研资料   XVII. R×2 列联表与2×C 列联表资料的统计分析与SAS 实现

  关雪, 胡良平, 王琪

  2012, 7(3): 235-238. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.03.016

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