中国医药生物技术

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    论著
  • 论著
    人胚胎主动脉血管内皮祖细胞的分离、培养及鉴定
    庄乾淑, 张文健, 叶丽亚, 刘虹麟, 曹妍婷, 成兰云, 丁浩, 娄晋宁, 刘鹏, 李建中
    2012, 7(2): 85-92. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.001
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    目的  研究人胚胎血管内皮祖细胞（EPCs）分离、扩增及鉴定的方法，并评价其分化成血管内皮细胞的能力，为人胚胎血管来源 EPCs 作为干细胞技术治疗疾病的细胞材料提供依据。 方法  从 14 周龄流产人胚胎主动脉中应用胶原酶消化法分离获得 EPCs，用含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和白血病抑制因子的低血清培养基体外扩增培养 EPCs。分离培养的 EPCs 鉴定采用细胞免疫荧光染色、RT-PCR 及流式细胞术，检测 EPCs 细胞的特异标志 CD133、CD34 和血管内皮细胞生长因子受体 2（VEGFR2）。培养的 EPCs 应用 VEGF 进行诱导分化，并评价其分化成为血管内皮细胞的能力。 结果  分离的人胚胎主动脉 EPCs 细胞表达 EPCs 的标志分子 CD133、CD34和 VEGFR2。EPCs 在体外特定低血清培养条件下表现很强的增殖能力。培养的 EPCs 细胞经过 VEGF 诱导后，细胞表达 CD133 明显降低，表达 vWF、CD31 和 ELAM-1 增强，并且体外成管能力和摄取 Ac-LDL 能力增强，表明细胞分化成为血管内皮细胞。 结论  人胚胎早期主动脉的 EPCs 具有很好的体外自我更新能力和分化成为血管内皮细胞的潜能，可作为 EPCs 治疗疾病的细胞材料。
  • 论著
    红色荧光蛋白在酿酒酵母中的表达特性研究
    史彦薇, 王志芳, 王伟, 安建梅, 孔建强
    2012, 7(2): 93-99. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.002
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    目的   研究红色荧光蛋白编码基因Dsred 在酿酒酵母菌中的快速克隆与表达。 方法   根据已发表基因序列设计引物，采用连续重叠PCR 方法快速克隆获得全长Dsred 基因，将其与pMD-18T 载体连接后进行测序鉴定。通过In-fusion 方法将鉴定正确的pMD-Dsred 重组载体与酿酒酵母表达载体pYeDP60 进行连接，测序后利用LiAc 方法将鉴定正确的pYeDP60-Dsred 重组表达载体转化至酿酒酵母菌W303-1B 中，PCR 扩增筛选阳性克隆，获得的W303B[pYeDP60-Dsred] 工程菌经诱导培养后进行SDS-PAGE 电泳分析和绿光激发荧光成像检测。将工程菌分别接种至YPD、YPG、SCG 和SCD 培养基，培养48、72、96、120 和144 h 后分别测定吸光度（A600）值。取诱导表达后的工程菌（菌液组）进行离心（菌体组）、离心后加甘油（高渗组）处理，分别置于–70、–20、4、28和37 ℃条件培养，荧光显微镜观察其表达特性。 结果   连续重叠PCR 扩增和测序鉴定结果表明，扩增获得的Dsred 基因长为678 bp，其序列与已发表的基因序列完全一致；Dsred 基因已成功插入pYeDP60-Dsred 重组表达载体，且受酵母诱导型启动子GAL10-CYC1调控表达。PCR 扩增筛选和SDS-PAGE 分析显示，pYeDP60-Dsred 重组表达载体已成功导入酿酒酵母菌中，诱导表达产物相对分子质量与预期相符，且诱导后工程菌可在绿光激发下发出红色荧光。4 种培养基内工程菌的菌体生长情况无明显差别，重组Dsred 红色荧光蛋白表达不会抑制酿酒酵母菌体生长。荧光显微镜观察显示，工程菌经不同处理后，高渗组红色荧光蛋白成熟时间最短，菌液组时间最长；红色荧光蛋白在37 ℃条件下培养时成熟最早，但降解速度较快。 结论   成功构建了pYeDP60-Dsred 重组酿酒酵母表达载体，实现了Dsred基因在酿酒酵母菌体内的异源表达。红色荧光蛋白表达对酿酒酵母菌体生长无明显影响，且离心保留菌体和加入甘油等缺水高渗处理都有利于红色荧光蛋白的成熟。
  • 论著
    肝脏特异HPPCn转基因小鼠的建立及表型分析
    文川, 赛岩, 白纪民, 刘勇, 常菁, 王智, 崔春萍
    2012, 7(2): 100-105. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.003
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  • 论著
    阿可拉定对子宫内膜癌HEC-1B细胞雌激素受体表达的影响
    彭瑶, 张文谨, 连增林, 靳冉, 李晋生, 孟坤
    2012, 7(2): 106-109. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.004
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    目的   研究阿可拉定对人子宫内膜癌细胞株 HEC-1B 雌激素受体的影响及作用机制。 方法   体外培养 HEC-1B 细胞，采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）、逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR），观察阿可拉定对 HEC-1B 细胞增殖作用以及雌激素受体 ER-α66 和新亚型 ER-α36 基因表达的影响。 结果   阿可拉定对 HEC-1B 细胞增殖具有明显的抑制作用，且抑制作用随药物浓度和给药时间的增加逐渐增强，72 h 阿可拉定的 IC50 值为 5.26 μmol/L。在抑制雌激素受体表达方面，阿可拉定组及阿可拉定联合顺铂组与空白组比较均可明显降低 ER-α36 的表达（P < 0.05,P < 0.01）；阿可拉定联合顺铂组还可明显降低 ER-α66 的表达（P < 0.01）。 结论   阿可拉定抑制子宫内膜癌细胞增殖的作用机制可能与其抑制细胞雌激素受体新亚型 ER-α36 基因表达有关。
  • 论著
    以肽脱甲酰基酶为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用
    张丽蓉, 赵莉莉, 魏玉珍, 李秋萍, 王莉宁, 余利岩
    2012, 7(2): 110-115. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.005
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    目的  建立以肽脱甲酰基酶（PDF）为靶点的抗结核药物高通量筛选模型，应用该模型筛选得到活性微生物发酵液粗提物样品。 方法  以结核分枝杆菌 H37Rv 基因组为模板，扩增肽脱甲酰基酶的基因片段 def，构建表达载体 pET-28a-def，表达并纯化结核分枝杆菌 PDF 酶；基于 PDF 水解三肽底物 for-Met-Ala-Ser 释放出游离 NH2，而游离 NH2 可与荧光胺反应产生荧光的原理，利用测定所产生荧光值的方法，建立高通量药物筛选模型；使用该模型对 12 400 个微生物发酵液粗提物样品进行筛选，同时以耻垢分枝杆菌为检定菌，平板纸片法检测样品的抗菌活性，并检测所得阳性样品的细胞毒性。 结果  成功构建了表达载体 pET-28a-def；所建立的模型稳定可行，可用于以肽脱甲酰基酶为靶点的抗结核药物的高通量筛选；用该模型对 12 400 个微生物发酵液粗提物样品进行筛选，最终得到 8 个对肽脱甲酰基酶抑制活性和抗耻垢分枝杆菌活性均较好的阳性样品，阳性率 0.06%；其中 5 个样品的细胞毒性较小。 结论  建立了灵敏度好、稳定性高的结核分枝杆菌肽脱甲酰基酶抑制剂高通量药物筛选模型，应用该模型所得到的阳性样品具有进一步深入研究的意义。
  • 论著
    链霉菌I06A-00625发酵产物的提取分离、结构鉴定及活性研究
    贾贝, 何宁, 赵莉莉, 余利岩, 蒋忠科, 姜蓉
    2012, 7(2): 116-119. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.006
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    目的 从链霉菌I06A-00625（cpcc201504）的代谢产物中分离得到具有抑菌活性的抗生素，并进行结构鉴定。 方法 通过大孔吸附树脂 X-5、葡聚糖凝胶 LH-20 和 HPLC 色谱对发酵液中活性成分进行分离纯化；根据紫外、高分辨质谱并结合 1H-NMR 和 13C-NMR 数据确定化合物结构，并进行抗菌活性研究。 结果  分离纯化得到 6 个单一组分，分别为化合物 I06A625A、206A和 206B 及 3 个四烯大环内酯类抗生素 Tetramycin A、Tetramycin B 和 Tetrin A。其中 206A 为首次从天然产物中分离得到。I06A625A 具有抗铜绿色假单胞菌活性；Tetramycin A、Tetramycin B 和 Tetrin A 具有抗真菌活性。 结论  链霉菌 I06A-00625 可产生抗铜绿色假单胞菌的核苷类化合物及抗真菌的四烯类化合物等多种活性成分。
  • 论著
    LC-MS/MS测定大鼠血浆中黄藤素含量及其药代动力学研究
    田开鑫, 肖丹, 彭衡阳, 刘天强
    2012, 7(2): 120-124. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.007
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    目的  建立大鼠血浆中黄藤素的 LC-MS/MS 定量方法，并利用此方法考察黄藤素在大鼠体内的药物动力学。 方法  色谱柱为 Zorbax Eclipse XDB-C18（2.1 mm × 50 mm，1.8 μm），流动相为 0.1% 甲酸溶液-乙腈（70:30），采用多级反应模式（MRM）检测；通过大鼠眼底静脉取血，血浆经乙腈沉淀蛋白，取上清液进行 LC-MS/MS 分析，测定黄藤素血药浓度，通过 DAS 2.0 计算其药动学参数。 结果  血浆中黄藤素在 0.442 ~ 44.2 ng/ml 范围内呈现良好的线性关系，方法学精密度、回收率、稳定性等均符合要求；大鼠体内黄藤素药动学符合二室模型特征，灌胃给予 40 mg/kg 黄藤素后，大鼠血浆中的黄藤素浓度在 2.8 h 达峰值，t1/2为 6 h，最大血药浓度为 19.8 ng/ml。 结论  本研究建立的大鼠体内黄藤素测定方法灵敏度高、专一性好，可用于黄藤素的体内药物动力学研究，为黄藤素应用研究提供了有力支持。
  • 论著
    树突状细胞诱导的CIK细胞对肺癌生长的抑制作用
    陈诗萍, 买世娟, 余杏娟, 柯妙拉, 夏建川, 高秋
    2012, 7(2): 125-129. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.008
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    目的  探讨树突状细胞诱导的 CIK 细胞对肺癌移植瘤细胞生长的抑制作用。 方法  建立肺癌皮下移植瘤模型；分离患者外周血单个核细胞，培养成熟的 DC 及 CIK 细胞；用反复冻融肺癌组织的方法制备肿瘤细胞裂解物并负载 DC，诱导 DC-CIK 细胞；进行肺癌移植瘤内注射，比较两组裸鼠移植瘤体积及重量，观察其抑瘤情况。 结果 DC-CIK 细胞对肺癌皮下移植瘤细胞的抑制率为 70.3%，抑制作用明显强于 DC 或 CIK 细胞的抑制作用（P< 0.05）。 结论  树突状细胞诱导的 CIK 细胞能够有效抑制肺癌移植瘤生长。
    • 综述
  • 综述
    以次黄嘌呤核苷酸脱氢酶为靶点的药物研发
    张大军, 仲兆金, 李卓荣
    2012, 7(2): 130-135. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.009
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  • 综述
    干细胞库研究应用进展
    张珍, 王佃亮
    2012, 7(2): 136-139. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.010
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  • 综述
    Hsa-miR-204的生物学信息分析及研究进展
    韩泽平, 黎毓光, 何金花
    2012, 7(2): 140-143. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.011
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  • 综述
    增强CpG免疫刺激作用途径的研究进展
    徐娜, 张雪梅, 王钦富
    2012, 7(2): 144-146. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.012
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  • 综述
    海洋生物活性药物对细胞周期与凋亡的调控在抗肿瘤治疗中的作用
    齐相薇, 张湘宁, 黄培春
    2012, 7(2): 147-150. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.013
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    • 技术与方法
  • 技术与方法
    EGFR抑制剂细胞磷酸化筛选模型的建立与应用
    纪潇朗, 于冰, 金华, 周祥, 徐春秀, 石玉, 李祎亮
    2012, 7(2): 151-153. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.014
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    • 讲座
  • 讲座
    如何用SAS软件正确分析生物医学科研资料   XVI. 用SAS软件实现2×2列联表资料的统计分析
    关雪, 胡良平, 王琪
    2012, 7(2): 154-158. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.015
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    • 特载
  • 特载
    斯坦曼的树突细胞与诺贝尔奖
    王轶楠, 孙丽光, 杨永广
    2012, 7(2): 159-160. https://doi.org/10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.016
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