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    司书毅 姜威 白硕可
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    微生物药物作为广泛使用的临床药物具有重要的地位,尤其是在抗感染、抗肿瘤、降血脂和抗器官移植排异方面具有不可替代的作用。自 1929 年青霉素被发现后,20 世纪 40 年代以来,已有上百种抗生素先后用于临床的细菌感染治疗、肿瘤化疗、降血脂以及器官移植抗排异反应。总体上,由于微生物药物特别是抗生素的广泛应用使人类的寿命延长了 15 年。广义的微生物药物即由微生物发酵获得的药物现约占全球医药生产产值的 50%。
  • 论著
  • 论著
    富岩, 韩国, 杨小楠, 富俞淞, 邢静, 胡俊霞, 陈颖, 云文琦, 于在林
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    目的 对两种长效干扰素 α 融合蛋白原料药的理化特性多项指标开展分析和进行比较。 方法 利用基因工程技术分别构建了可高效表达重组人血清白蛋白/干扰素 α2a 融合蛋白(rHSA/IFNα2a)或重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白(rHSA/IFNα2b)的毕赤酵母工程菌。融合蛋白直接分泌到组分简单的无机盐培养基中,并经特别建立的高效分离纯化工艺进行纯化,随后对两个融合蛋白进行详尽的理化特性分析。 结果 获得的融合蛋白纯度在 98% 以上;N 端前 15 个氨基酸序列与理论序列相同;质谱分子量分别为 85640.8 D和 85781.5 D;圆二色光谱分析比对蛋白空间构象未变;等电点 pI 约在 5.1 左右;为非糖基化蛋白;紫外光谱呈典型蛋白质光谱;自由巯基含量测定值为 1.4;肽图批次间一致;肽质量指纹图谱可匹配分别达 83% 和 82%;对制备的 2 个融合蛋白原料药中的细菌内毒素、宿主蛋白质、外源 性 DNA、甲醇和甘油的残留量检测符合标准要求;融合 蛋白的免疫学鉴别为阳性;体外细胞生物比活性约为 2.5 × 105 IU/mg,并且 2 个融合蛋白生物比活性测定值无不同,由此,获得了符合临床用药标准的原料药。 结论 研究所获得的结果可以作为指导《注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2a 融合蛋白》和《注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白》2 个新药的原料药生产质量标准的建立和检定方法的确定。
  • 论著
    沈阳 张书红 汤亭亭
    2011, 6(2): 3-96-100.
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    目的 比较不同来源成体干细胞 BMP-2 基因转染并微囊化后的存活情况,并检测分泌至微囊外的 BMP-2 蛋白 数量。 方法 从大鼠的骨髓、脂肪和滑膜组织内分离培养不同类型的成体干细胞:骨髓间充质干细胞(BMSCs)、脂肪干细胞(ADSCs)和滑膜干细胞(SMSCs)。利用高压静电装置制备海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)标记细胞在微囊内的存活情况。利用含有 BMP-2 基因的重组腺病毒感染不同来源的成体干细胞后微囊化包裹,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测分泌到微囊外的 BMP-2 蛋白量。 结果 包裹 4 周后荧光显微镜观察发现,BMSCs、ADSCs 和 SMSCs 可在微囊内长期存活。ELISA 检测发现,3 种转基因细胞在微囊化后都可以持续分泌 BMP-2 蛋白,其中 BMSCs 分泌最多,在第 2、3、4 周和其他 2 种细胞相比有明显差异(P < 0.01)。 结论 3 种来源的成体干细胞都可以作为 BMP-2 基因给药促进骨再生研究的候选细胞,其中以骨髓来源的间充质干细胞为首选。
  • 论著
    鞠瑞 武丹威 郭磊 李娟 叶菜英 张德昌
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    目的 观察羧胺三唑(CAI)对 A549 肺癌移植瘤生长及肿瘤环境中肿瘤坏死因子-α 含量和血管生成的影响,研究小剂量地塞米松(DEX)是否能通过降低肿瘤环境中肿瘤坏死因子-α 含量和抑制血管生成增强 CAI 对移植瘤生长的抑制作用。 方法 向裸鼠腋下接种 A549 肺癌细胞,建立 A549 肺癌移植瘤模型,接种第 2 天随机分5 组,并开始给药,分别是 PEG400 溶剂对照组(每天一次灌胃给药,0.1 ml/10 g 体重)、CAI 组(每天一次灌胃给药,20 mg/kg)、DEX 组(每周两次背部皮下注射给药,1 mg/kg)、CAI 与 DEX 合用组(CAI,每天一次灌胃给药,20 mg/kg;DEX,每周两次背部皮下注射给药,1 mg/kg)及英夫利昔单抗组(每周两次腹腔注射给药,10 mg/kg)。40 d 后剥离瘤组织,拍照并称重;将部分新鲜肿瘤组织速冻后制作冰冻切片,进行 CD31 荧光染色;另一部分新鲜瘤组织制备匀浆后用 ELISA 方法对其 TNF-α 含量进行检测。 结果 CAI、DEX 和 TNF-α 抗体(英夫利昔单抗)对移植瘤生长均有抑制作用,而 CAI与 DEX 的联合应用抑癌作用最强,PEG、CAI、DEX、COM 和 TAB 组瘤重分别为(0.23 ± 0.04)、(0.21 ± 0.02)、(0.17 ± 0.04)、(0.12 ± 0.03)和(0.17 ± 0.04)g。CD31 血管染色显示,CAI 和 DEX 均能减少肿瘤组织内的血管数目,两者合用在极大程度上抑制了血管的生成;CAI 能够降低肿瘤组织内 TNF-α 含量,与 DEX 合用使 TNF-α 含量降至更低水平,PEG、CAI、DEX、COM 和 TAB 组肿瘤组织匀浆中 TNF-α 的含量分别为(933.9 ± 286.8)、(636.1 ± 157.4)、(684.9 ± 170.1)、(364.7 ± 50.1)和(606.8 ± 190.3)pg/mg 蛋白。 结论 CAI 不仅能够直接影响肿瘤细胞的增殖和凋亡,还能通过调控肿瘤环境中的 TNF-α 抑制血管的生成,从而减缓肿瘤的生长,这可能是 CAI 发挥抗肿瘤作用一个新的机制。小剂量 DEX 与 CAI 联合用药对移植瘤生长的抑制作用明显增强,优化了 CAI 的抗肿瘤作用,可能成为一种新的联合用药方案。
  • 论著
    高旭 周正 沈恩允 景晓娟 郭雷鸣 王仙斌 孙劲文 杜云峰
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    目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导配体受体(DR5)激动型单抗 CTB006 对人结直肠癌细胞系 SW1116、SW480、SW620、Colo205 的影响。 方法 采用 ATPlite 法检测 CTB006 组、5-FU 组及两药物合用组作用后的细胞存活率,流式细胞仪技术检测细胞系表面 DR5 的表达水平,研究两者之间的关系。 结果 CTB006 和 5-FU 对四种结直肠癌细胞增殖均表现出抑制作用。CTB006 对早期细胞 SW1116 增殖抑制效果欠佳,对中晚期细胞 SW480、SW620、Colo205 有着良好的增殖抑制作用(P < 0.05)。当联合使用 5-FU 后,对后三者有明显的协同作用。流式细胞仪检测 DR5 表达水平,SW1116 细胞表达(47.01 ± 30.4)%,SW480 细胞表达 (76.11 ± 15.1)%,SW620 细胞表达(86.77 ± 9.3)%,Colo205 细胞表达(93.55 ± 7.9)%。 结论 CTB006 对中晚期结直肠癌杀伤作用较强,联用 5-FU 具有显著的协同作用。
  • 论著
    谢兴亮 盛艳梅 韩丽 杨明
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    目的 评价愈肠宁胃-结肠分释胶囊的药效,并探讨其作用机制。 方法 SD 大鼠 48 只,按体重随机分为正常组、对照组、阳性对照组、愈肠宁胃-结肠分释胶囊低剂量组(胶囊低剂量组)、愈肠宁胃-结肠分释胶囊高剂量组(胶囊高剂量组)、愈肠宁溶液组(溶液组),每组 8 只。正常组、对照组均给予同体积生理盐水,阳性对照组给予柳氮磺吡啶肠溶片,其余 3 组分别给予不同剂量的愈肠宁胃-结肠分释胶囊和愈肠宁溶液。各组给药 3 d 后,以三硝基苯磺酸诱导建立大鼠溃疡性结肠炎模型,各组继续给药至 8 d 后结束实验,取大鼠结肠组织测定肠重系数,观察并评价给药后结肠组织损伤指数,同时检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)、TNF-α、IL-1β、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。 结果 与正常组比较,对照组大鼠肠重系数、结肠组织损伤指数差异显著,结肠组织 SOD 水平显著降低,MPO、TNF-α、IL-1β、MDA 水平显著升高。与对照组相比,各给药组大鼠肠重系数、结肠组织损伤指数(P < 0.05,P < 0.01)以及 MPO、TNF-α、IL-1β、MDA 水平均显著降低;胶囊高剂量组、阳性对照组大鼠结肠组织 SOD 水平均显著升高。与溶液组相比,阳性对照组、胶囊高剂量组大鼠肠重系数、结肠组织损伤指数均显著降低(P < 0.05,P < 0.01);胶囊高剂量组大鼠结肠组织 SOD 水平明显升高,MPO、TNF-α、IL-1β 水平均显著降低(P < 0.05,P < 0.01),MDA 水平则无明显差异。 结论 通过抑制炎性细胞浸润和促炎因子的异常释放,以及调节失衡的氧自由基系统等作用机制,愈肠宁胃-结肠分释胶囊表现出与同剂量愈肠宁溶液相比更明显的疗效优势,具有良好应用前景。
  • 论著
    牛玉强 姜威 余利岩 王彦昶 李妍 司书毅
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    目的 从微生物代谢产物中分离和纯化 Aurora-B 激酶抑制剂并检测其抗肿瘤活性。 方法 以野生型酵母菌 Y300 和 ipl1-321 温度敏感型突变株为模式菌跟踪活性组分;从阳性放线菌 I07A-01038 发酵产物中分离纯化活性化合物并进行结构鉴定;体外酶学实验验证阳性化合物对 Aurora-B 激酶的抑制活性;MTT 法检测阳性化合物对肿瘤细胞增殖的抑制活性;AnnexinV- FITC/PI 双染法检测活性化合物对肿瘤细胞早期凋亡的诱导作用。 结果 从阳性放线菌 I07A-01038 发酵产物中得到活性化合物酒渣碱甲酯(flazin methyl ester),酒渣碱甲酯对 ipl1-321 突变株具有特异性抑制作用,其在野生型酵母菌 株 Y300 和突变株 ipl1-321 的 IC50 分别为 48 μmol/L 和 24 μmol/L;体外酶学实验证实其对 Aurora-B 激酶具有抑制作用,其 IC50 为 10 μmol/L(ATP = 50 μmol/L);酒渣碱甲酯对 HepG2、A549、Hela 肿瘤细胞均具有杀伤活性,IC50 分别为 13、11 和 10 μmol/L。并能够诱导 Hela 细胞发生早期凋亡。 结论 得到一个微生物来源的具有抗肿瘤活性的 Aurora-B 激酶抑制剂—酒渣碱甲酯。
  • 论著
    于彦婷 任丽 孙春玉 蒋世翠 王义 张美萍
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    目的 探讨 SQE 基因对人参皂苷合成的影响。 方法 根据 SQE 基因保守区序列,分别设计合成其正反义片段引物行 RT-PCR 扩增,扩增产物分别与 pMD18-T 质粒连接后转化 E.coli DH5α,获得的 pMD18-T-SQE-S、pMD18-T-SQE-A 重组质粒经双酶切后,将正反义片段与质粒 pMHZ112 反向连接,转化 E.coli DH5α,构建 SQE 基因 RNAi 双元表达载体 pMHZ112-SQE。电击法将鉴定正确的重组质粒 pMHZ112-SQE 转化农杆菌 GV3101 感受态细胞,再利用农杆菌介导法转化人参愈伤组织,提取抗性人参愈伤组织细胞基因组 DNA,进行 PCR 检测并计算抗性愈伤转化率;同时提取人参皂苷,采用 HPLC 方法检测抗性人参愈伤组织的皂苷含量。 结果 结果显示总 RNA 较完整无降解,质量较好;RT-PCR扩增产物正反义片段大小与预期一致;重组质粒 pMD18-T-SQE-S、pMD18-T-SQE-A 和 pMHZ112-SQE 分别经双酶切进行测序鉴定,结果表明目的基因已插入重组质粒且连接方向正确。人参愈伤组织细胞基因组 DNA 的 PCR 检测结果显示 1 个菌落经 2 对引物扩增结果均呈阳性,证明构建的 pMHZ112-SQE 重组质粒已成功整合入植物基因组中,其抗性愈伤转化率为 1%。转化 pMHZ112-SQE 重组质粒后,人参抗性愈伤组织中单体皂苷 Rg1、Re、Rc 含量明显下降,Rb1 略有升高,实验组与对照组(转化空质粒)间 Rg1、Re、Rb1、Rc 的含量差异显著(均 P < 0.05);而 2 组均未检测出 Rb2 和 Rd。 结论 成功构建了 SQE 基因 RNAi 双元表达载体,通过转化人参愈伤组织抑制 SQE 基因的表达,可以调控人参皂苷含量发生相应的改变。
  • 综述
  • 综述
    熊琴梅 洪葵
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    过去的 20 余年中,由于人们对心力衰竭(心衰)发病的细胞分子机制的理解,并相应制订出了有效的治疗方法,从而使心衰逐渐转变成一种慢性病。但是,心衰尤其是慢性心衰仍然是心源性死亡的主要原因。随着全球老龄化进程,心衰患病率持续增长,从而耗费了巨大的人力和物力。近年来,随着对心衰进程中神经体液调节、心肌能量代谢、细胞钙循环和心肌细胞凋亡等内在机制认识的深入,针对心衰病程各环节中所涉及的分子治疗研究相继展开。探索针对细胞和整个器官水平发病机制的新疗法来遏制或扭转这种疾病的严重后果显得尤为重要。本文就心力衰竭的分子治疗机制研究进展进行综述。......
  • 综述
    贾晋斌 倪淑欣
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    90% 的肝癌为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),是全球除胃癌和食管癌外的第 3 种常见肿瘤,全世界每年新增肝癌病例超过 100 万。我国是全球肝癌发病率最高的国家,在常见肿瘤中肝癌发病率仅次于肺癌,居第 2 位。肝癌恶性程度较高、病情进展快,大部分患者(> 80%)就诊时已为晚期,不适合手术切除。即便可以手术切除的肝癌,2 年复发率也高达 50%。晚期肝癌的治疗相当棘手,尚无标准治疗方案,预后差,传统化疗后平均中位生存期仅为 3 ~ 5 个月。过去的 20 年间,肝癌患者的相对 5 年生存率仅由 3% 增长到 4% ~ 7%[1],主要原因归结于肝癌的高复发性和没有有效的药物治疗。肝癌的药物治疗可归纳为两大类:即肝癌切除术后的辅助药物治疗和无法切除的肝癌药物治疗。研究和应用有效的、可耐受的治疗肝癌的新药仍是未来长期的持续性工作。近年来肝癌治疗新药临床研究较多的主要有索拉非尼、PI-88、酪丝亮肽,本文针对这 3 种新药的临床研究进展作一综述。
  • 综述
    姜美娟 王华强 王丹丹 梁冰
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    凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative staphylococci,CoNS)是人体皮肤和黏膜上定居的正常菌群之一,因其几乎不产生对人体有毒性的酶和毒素,故一般认为是非致病菌。20 世纪 70 年代以前,关于 CoNS 引起的感染仅有个别报道,20 世纪 80 年代后,由于革兰阳性菌的抗生素广泛使用,以及介入性治疗、留置导管和组织器官移植等治疗手段的应用,CoNS 成为医院感染的重要机会致病菌之一,并出现多重耐药株。本文就 CoNS 生物膜的形成与检测进展进行了综述。
  • 综述
    李万忠 田景振
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    白藜芦醇(resveratrol)为非黄酮类多酚化合物,具有抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗突变、抗氧化、抗菌消炎、保护肝脏、诱导细胞凋亡、雌激素样作用及降低血糖等多种生物活性[1-3]。白藜芦醇自然资源丰富,加之具有较高的安全性,故在医药、食品、化妆品等行业中有着广阔的应用前景。基于白藜芦醇难溶于水,口服吸收较差,生物利用度较低[4],如何利用现代药剂学手段提高溶解度和生物利用度已成为一个备受关注的问题。本文主要针对白藜芦醇新剂型的研究进展进行综述,以期为白藜芦醇进一步开发和利用,同时也为提高微溶性药物的生物利用度提供一定参考和指导。......
  • 技术与方法
  • 技术与方法
    陈书安 王晓东 袁晓凡 赵兵 王玉春
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    藏红花(Crocus sativus L.)被誉为“植物黄金”,是一种名贵的妇科良药,有望成为 21 世纪最理想的抗癌药物之一[1-3]。但藏红花种植条件苛刻、适宜栽培的地区有限、田间栽培过程易感染病毒,加之其柱头入药、产量极低,致使其资源短缺、价格昂贵[3-4]。通过植物细胞培养体系生产藏红花素,是解决藏红花资源短缺的有效途径之一[3],其中生物反应器技术是其实现产业化的关键技术之一。 为建立藏红花细胞培养体系,从诱导的 229 株藏红花愈伤组织中筛选出一株藏红花素含量高、生长速度快的细胞系[4-5];经脱毒处理,该细胞系无国内外报道的侵染藏红花的病毒[6],经优化建立了其摇瓶培养体系[7-8]。为实现藏红花素的规模化生产,选择鼓泡塔式反应器作为研究的对象,探求其生物反应器培养的参数。......
  • 技术与方法
    王恺源 高永良
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    生物可降解注射微球是近三十年来药剂学的研究热点之一[1],它能够显著延长给药间隔,大大提高患者用药的顺应性,同时维持最低有效浓度,减少给药次数。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)由于其良好的生物相容性和可降解性,已被 FDA 正式批准为药用辅料。但缓释微球释放周期较长,给处方筛选和日常质量控制带来较多困难。因此,建立体外加速释放度试验方法,从而快速地评价微球的释药性质,缩短处方工艺优化的周期,有助于制剂工作者更加快速有效地进行处方分析。  度他雄胺(dutasteride)是第 2 代 5α 还原酶抑制药,是目前第一种也是唯一一种同时抑制 I 型和 II 型 5α 还原酶的药物[2],由葛兰素公司研究开发。2002 年美国食品与药品管理局批准其在美国上市。度他雄胺能长久改善症状性良性前列腺增生(BPH)症状,减少急性尿潴留的发生,同时具有很好的预防癌变作用。鉴于患者需要每日服药,为了减少给药次数,提高患者用药的依从性,以聚乳酸-羟基乙酸共聚物 PLGA(75/25)15000 为载体,采用 O/W 型乳化溶剂挥发法制备了在体外可缓释 28 d 的度他雄胺微球。本研究通过三个处方进行加速试验分析,主要考察高温和不同 pH 值的释放介质对度他雄胺微球释药速度的影响,本文筛选其中一个最佳方程作为相关性方程,以期建立与长期释放度试验具有良好相关性的加速实验方法。 ......
  • 讲座
  • 讲座
    李瑛琦 彭茂祥 冀小强
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    编者按 知识产权,特别是专利在促进我国医药生物技术研发和产业发展中的作用是不言而喻的。尤其是我国加入世贸组织以后,医药企业实现由仿制向自主创新的模式转变将成为大势所趋,为了能及时有效地保护科研成果,申请专利是最佳选择。为了帮助广大医药工作者了解医药及生物领域知识产权保护的政策和法规细则,提高发明专利申请文件的撰写质量,了解专利局的审查实践,更好地做好专利申请工作。我刊特邀了中国专利技术开发公司及相关专家撰写了系列讲座,希望能够对医药企业,科研院所的相关工作人员提供一定的帮助。
  • 讲座
    胡良平 贾元杰 高辉
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    编者按 生物统计学是生物学领域科学研究和实际工作中必不可少的工具,在分子生物学迅速发展的今天,生物统计学更显示出了它的重要性。实验设计与数据统计分析是现代生物学的基石,是生物学研究者检验假说、寻找模式、建立生物学理论的有利工具,也是生物学研究者探索微观和宏观生物世界的必备基础知识。对于每天甚至是每时每刻涌现的大量的、以天文数字计量的分子遗传数据,必须借助统计学知识加以分析处理,才能从中获得有意义的信息。“生物多样性数据分析”是开展生物多样性研究的一个重要方面,数据分析能力的高低极大地影响着我们对各种生态学现象认识的深度和广度。现在,电子计算机的普及使得生物统计分析过程大大简化,生物统计分析软件包的普及将生物统计学从统计学家的书本里解放了出来,简化了生物统计分析过程,使之成为生物学研究者的常用工具。本刊特邀军事医学科学院生物医学统计学咨询中心主任胡良平教授,以“如何用 SAS 软件正确分析生物医学科研资料”为题,撰写系列统计学讲座,希望该系列讲座能对生物医学科研工作者有所帮助。
  • 特载
  • 特载
    赵贵英 张树庸
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    2010 年下半年生命科学与生物技术研究领域日新月异,新技术、新方法、新成果层出不穷。美国《科学》杂志评出了 2010 年十大科学突破,其中生命科学就占了八项,这足以说明生命科学研究的发展速度。  ⑴合成生物学:在生物学和生物技术的一个决定性时刻,研究人员组合了一个合成基因组,并用它转变了一种细菌的身份特性。合成基因组取代了细菌的核糖核酸,导致其生产出一组新的蛋白质。该研究成就促使美国国会召开了关于合成生物学的听证会。研究人员预计,未来量身定制的合成基因组可用来产生生物燃料、医药品或其他有用的化学制品。.......