论著
富岩, 韩国, 杨小楠, 富俞淞, 邢静, 胡俊霞, 陈颖, 云文琦, 于在林
目的 对两种长效干扰素 α 融合蛋白原料药的理化特性多项指标开展分析和进行比较。 方法 利用基因工程技术分别构建了可高效表达重组人血清白蛋白/干扰素 α2a 融合蛋白(rHSA/IFNα2a)或重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白(rHSA/IFNα2b)的毕赤酵母工程菌。融合蛋白直接分泌到组分简单的无机盐培养基中,并经特别建立的高效分离纯化工艺进行纯化,随后对两个融合蛋白进行详尽的理化特性分析。 结果 获得的融合蛋白纯度在 98% 以上;N 端前 15 个氨基酸序列与理论序列相同;质谱分子量分别为 85640.8 D和 85781.5 D;圆二色光谱分析比对蛋白空间构象未变;等电点 pI 约在 5.1 左右;为非糖基化蛋白;紫外光谱呈典型蛋白质光谱;自由巯基含量测定值为 1.4;肽图批次间一致;肽质量指纹图谱可匹配分别达 83% 和 82%;对制备的 2 个融合蛋白原料药中的细菌内毒素、宿主蛋白质、外源 性 DNA、甲醇和甘油的残留量检测符合标准要求;融合 蛋白的免疫学鉴别为阳性;体外细胞生物比活性约为 2.5 × 105 IU/mg,并且 2 个融合蛋白生物比活性测定值无不同,由此,获得了符合临床用药标准的原料药。 结论 研究所获得的结果可以作为指导《注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2a 融合蛋白》和《注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白》2 个新药的原料药生产质量标准的建立和检定方法的确定。