目的 研究酶标纳米金探针的制备条件,并构建利用酶标纳米金探针检测蛋白质的检测体系,实现对蛋白质的高灵敏度检测。
方法 首先标记捕获抗体的磁珠探针、抗原及标记检测抗体和辣根过氧化物酶(Streptavidin-peroxidase,SA-HRP)的纳米金探针(AuNP probes)进行免疫反应形成三明治结构,然后利用磁力分离器收集三明治结构,再加入四甲基联苯胺(Tetrabenzidine,TMB)溶液发生酶促显色反应,最后在450 nm 处进行分光光度检测,从而间接测定蛋白质含量。
结果 通过一系列优化实验建立检测体系,具体为:纳米金探针重悬液确定为 50 mmol Tris(pH7.8,1.25% 蔗糖,0.2% BSA,0.05% PEG,0.05% PVP,0.15% Tween20);检测体系中纳米金的最适加入量为 3 µl;2 步孵育最适时间依次为 1 h和 45 min。使用该方法检测并绘制癌胚抗原(CEA) 标准曲线,表明 CEA 浓度在 250 pg/ml ~ 25 ng/ml 区间时线性关系良好,R2 为 0.991。通过灵敏度实验表明该检测体系的最低检测灵敏度为 25 pg/ml,而传统 ELISA 方法的检测灵敏度仅为 1.65 ng/ml。
结论 酶标纳米金探针检测体系实现了通过普通光学仪器进行高灵敏度蛋白质检测的目标,是一种很有发展前景的蛋白质检测技术。
目的 探讨在基因芯片聚类分析前对数据进行主成分分析是否有助于提高聚类的准确性。
方法 选取 3 组包含大量被生物学家人为分类基因的芯片数据集 Budding yeast、Saccharomyces cerevisiae、Central nervous system 作为实验数据,分别计算对原数据直接聚类和提取主成分后聚类的结果,并以信息变化量为指标衡量这些结果与人为分类的匹配度。采用启发式算法搜寻最优主成分组合,比较欧几里德距离和相似系数 2 种距离度量方法以及层次聚类和 K-重心聚类 2 种聚类算法的结果。
结果 在 3 组数据集中,层次聚类算法相比 K-重心聚类算法效果均略好,且以主成分代替原数据进行聚类分析都没有显著提高聚类的准确性,有些情况下甚至不如后者。仅在 Saccharomyces cerevisiae 数据集中,当主成分个数足以覆盖原数据中 90% ~ 95% 方差时,特定的主成分组合才展现出一定优势,但这种组合与主成分大小顺序并无规律可循。
结论 在基因芯片数据模型不清时,应避免盲目地使用数据中提取的主成分作为聚类分析的输入.
目的 高效诱导表达并纯化具有活性的重组 PTP1B 融合蛋白(rhPTP1B),进行酶活性及抑制剂的实验。
方法 重组体 pGEX-hPTP1B 转化 E.coliDH5α,诱导表达 rhPTP1B 并优化条件后,超声取细胞裂解上清液经 GST 亲和层析柱纯化后,利用 rhPTP1B 水解特异性底物 4-硝基苯基磷酸二钠盐(pNPP-Na2)的磷酸基团而产生颜色反应来测定 rhPTP1B 活性,并分析其与 rhPTP1B 浓度、底物浓度及反应温度的关系,钒酸钠(Na3VO4)抑制类型的研究,老鹰茶总黄酮(TFLC)对 rhPTP1B 的抑制性作用和浓度依赖关系。
结果 rhPTP1B 表达的最适条件是在 34 ℃ 和 2.0 mmol/L IPTG 下诱导表达 10 h,可被 GST 亲和层析法分离纯化;其活性随酶浓度及底物浓度的增加而增加,35 ℃ 时 rhPTP1B 的活性最大;钒酸钠的作用机制可能为非竞争性抑制作用;TFLC 对 rhPTP1B 有明显的抑制作用。
结论 诱导表达纯化的 rhPTP1B 融合蛋白可用于抑制剂的研究,TFLC 对 rhPTP1B 的强抑制作用可能是其降低糖尿病大鼠血糖浓度的机制之一。
为做好甲型 H1N1 流感防控工作,落实卫生部关于进一步加强甲型 H1N1 流感防控工作视频会议精神,2009 年 5 月 22 日,国家食品药品监督管理局就加强医用防护口罩、医用防护服、呼吸机等防控甲型 H1N1 流感有关医疗器械的生产、经营监管工作印发通知。
《通知》要求,各地食品药品监管部门要高度重视防控甲型 H1N1 流感有关医疗器械的生产、经营监管工作,全面及时掌握本辖区内防控甲型 H1N1 流感有关医疗器械生产企业的生产动态、销售情况,做好企业监督指导工作,督促企业规范生产,保证防控产品的质量安全;要立即组织人员对本辖区内防控甲型 H1N1 流感有关医疗器械的生产、经营企业进行监督检查,对检查中发现的防控甲型 H1N1 流感有关医疗器械的生产、经营违法违规行为要依法严肃处理;要加强防控甲型 H1N1 流感有关医疗器械的生产、经营监管信息沟通,保证监管信息及时上报。详情可登陆国家食品药品监督管理局网站查阅(http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0050/38138.html)。